之可康与辛伐他汀及其配伍对大鼠血脂异常模型影响的实验研究
【摘要】 目的 对血脂异常动物模型应用之可康、辛伐他汀及二者联合治疗，评价中药之可康的调脂作用及其对大鼠血管和肝脏的影响。方法 将40只大鼠随机分为5组，即正常组、模型组、之可康治疗组、辛伐他汀治疗组、之可康与辛伐他汀联合治疗组(两种药物各半量)。实验末，检测不同组别大鼠血清中的血脂、转氨酶及肝脏组织中脂质，以及肉眼和光镜下观察肝脏、腹主动脉的病理形态学改变。结果 治疗组的血脂均接近正常对照组，与模型组相比，差异有显著性。辛伐他汀组对成模时增高的ALT、AST和肝组织中的脂质及脂肪肝影响不大，与模型组相比无差别;之可康组和联合治疗组均可明显降低成模时升高的AST和ALT及肝组织中的脂质，逆转脂肪肝，与正常组相比无差别，与模型组、辛伐他汀组分别相比差异有显著性;联合用药组血脂水平调节幅度最大，对肝脏的影响与之可康组相比无差别。3个治疗组均可使动脉硬化斑块回缩。结论 之可康能有效地调节异常血脂，逆转动脉硬化，逆转脂肪肝;之可康与辛伐他汀(各半量)联合应用调脂、保肝、逆转动脉硬化的效果优于单一用药。
关键词 大鼠血脂异常 脂肪肝 之可康 辛伐他汀
, 百拇医药
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2004)02-0101-03
The experimental study on the influence of the ZhiKeKang，Simvastatin
and their combined application upon the rat model with dyslipidemia
Li Ping，Li Xiaogang
The Second Hospital，Shanxi Medical University，Shanxi030001.
【Abstract】 Objective On the basis of building rat model with dyslipidemia，we treat the rats with ZhiKeKang(ZKK)，Simvastatin and the both，to evaluate the regulative effect to blood lipid of the Chinese medicine-zkk，and the influence on the blood vessel and liver，meanwhile，to find out a better therapy fordyslipidemia.Methods Dividing at random40rats into5groups，namely the group of normal lipidemia，of model with dyslipidemia and three groups of treatment with ZKK，Simvastatin and the both.Examining the values of TC，TG，LDL-C，ALT，AST in the serum and that of TC，TG in the liver，meanwhile observing the pathological change of the liver and abdominal aorta by naked eyes and microscpe.Results The blood lipid value in the treatment groups is significantly different from that before treatˉing.In the group of treatment with ZKK，the AST，ALT and the lipid in the liver decrease significantly and differ from the natural recovery group’sbut the normal group’s.In the group of treament with Simvastatin，the affection to the ALT，AST and the lipid in liver is no apparent，there is no difference campared to that of recovery group，but very difˉferent from that of treatment group with ZKK，In the combined treatment group，the effect to decrease the bloodlipid is significant，the influence on liver is similar to the ZKK’s.Conclusion Rich-fat food can induce dyslipidemia，atheromatous patch and hepar adiposum.ZKK can effectively regulate dyslipidemia and protect the liver’s function.The combined application of ZKK and Simvastatin(half dose of the both)is more effective in treating dyslipidemia and decreasing the damage to the liver.
, 百拇医药
Key words rat dyslipidemia fatty liver ZhiKeKang simvastatin
本文在建立血脂异常、脂肪肝动物模型基础上，选用中药之可康(又称虎杖片)与辛伐他汀进行对比研究，来评价之可康的调脂作用，并观察二者联合使用是否能协同降脂及拮抗辛伐他汀损肝的毒副作用，探索一种中西药物结合治疗血脂异常的最佳方案。
1 材料与方法
1.1 实验动物 由山西医科大学动物中心提供40只8周龄、体重(20±13)g健康清洁级雄性Wistar大鼠，随机分为5组，每组8只;室温控制在(23±2)℃，相对湿度60%。
1.2 方法 (1)正常组(Normal组):以普通饲料喂养3个月;(2)血脂异常脂肪肝模型组(Model组):以高脂饲料喂养大鼠2个月，之后以普通饲料喂养1个月。(3)3个治疗组(Treat组):以高脂饲料喂养2个月，造模成功后改用普通饲料喂养的同时，每日上午8时灌喂药物一次，持续1个月。Treat 1 组:2.5mg·kg -1 ·d -1 辛伐他汀;Treat 2 组:0.82g·kg -1 ·d -1 之可康;Treat 3 组:两种药物以上述剂量减半。所有大鼠在实验3个月末，末次给药后禁食12h，经内眦静脉采血1.5～2ml，3000rpm离心20min，测定血清TC、TG、HDL、LDL、AST、ALT;3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，取腹主动脉将其纵行切开，观察是否形成脂质沉积斑块;取肝脏肉眼观察其形态;腹主动脉、肝脏组织用10%福尔马林固定，横切成三块，常规石蜡包埋切片，HE染色观察病理学变化;取肝脏的一叶 [1] ，除去附着的脂肪及其它组织，扭力天平称重，电动匀浆器研成匀浆，按每克样本用9ml的比例加入氯仿-甲醛混合液(2:1)，离心沉淀取上清液5～10ml，用显色法测定胆固醇、甘油三酯含量(mg/g)。
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1.3 统计学方法 采用SPSS8.0版本进行统计学处理。血脂、转氨酶、肝脏脂质的测定值以ˉx±s表示，均数间比较采用单因素方差分析，两两间比较采用q检验;P<0.05为有统计学意义。
2 实验结果
2.1 药物治疗对大鼠血清脂质的影响 见表1。模型组与正常组比较，各项指标差异具有显著性。说明模型制作成功。TC:之可康组与基余四组相比均有差异;联合组与正常组、辛伐他汀组比无差异。TG:之可康组、联合组与正常组比均无差异;与辛伐他汀组比均有差异。HDL、LDL:3个治疗组之间两两比以及分别与正常组比均无差异。
2.2 药物治疗对大鼠肝脏脂质及转氨酶的影响 见表2。模型组与正常组比较，AST、LTC、LTG差异有显著性，ALT差异不显著。AST、ALT、LTC、LTG:正常组、之可康组、联合组两两比较均无差异;分别与模型组、辛伐他汀组比均有差异。
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表1 药物治疗对大鼠血清脂质的影响
注:与Normal组比较， P<0.05， P<0.01;与Model组比较， P<0.05，P<0.01;与Treat 1 组比较， P<0.05， P<0.01;与Treat 2 组比较， P<0.05;下同
表2 药物治疗对大鼠肝脏脂质及转氨酶的影响
2.3 饲养3个月末的大鼠血管及肝脏的形态学改变 腹主动脉:正常组内膜光滑;模型组内膜可见淡黄色条纹，宽1～2mm，长度不等，有微隆起的斑块;光镜下:内膜有大量泡沫细胞，有泡沫细胞裂解，脂质类物质游离于细胞外。3个治疗组内膜光滑，镜下偶见泡沫细胞。肝脏:正常组外形、色泽均正常;镜下见肝小叶结构完整清晰，肝索排列整齐。模型组:体积增大、色泽黄腻;光镜下肝细胞体积增大，胞内有大量脂肪空泡。辛伐他汀组肝脏同模型组。之可康组与联合用药组肝脏基本同正常组。
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3 讨论
3.1 血脂异常 指由于脂肪代谢或运转异常使血中的TC、TG、LDL-C增高及HDL-C降低，它在动脉粥样硬化及其心血管事件的发生发展中起重要的作用。最具影响力的北欧辛伐他汀生存研究(4S试验)，证实了应用降胆固醇药物作长期治疗，使得总死亡率降低30%，冠心病危险率降低42%。国外大病例数的流行病学调查及心脏研究结果还证实，血TG增高也是发生心肌梗死的独立危险因素，因 此，血脂异常患者应接受调脂治疗 [2] 。当前治疗中存在3个问题:(1)长期以来调脂的主要目标是降低TC，而高TG的治疗研究较少;(2)调脂药一般都需长期服用，但目前较有效的调脂药大多对肝功能有影响，如降TC的代表药他汀类药物;(3)单一用药，难以达到预期的调脂目标值 [3] 。所以，探讨安全有效的调脂药物以及合理的联合用药方案是临床上应该考虑的问题。
3.2 建立模型 用大鼠建立血脂异常、AS及脂肪肝模型，有饲养方便，抵抗力强，食性与人相近优点。特别是形成的病理改变与人早期相似，便于进行调脂药物疗效及机制探讨 [4，5] 。
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3.3 中医观点 中医认为，血脂异常是由痰浊滞留，瘀血阻络，肝失疏泄，脂质沉积于血管、肝脏而发病 [6] 。之可康是以天然虎杖为主要原料，有缓泻利尿、通经、去瘀、解毒等功效，通过化痰、活血、健脾、补肾可以调节血脂、保护肝脏。
3.4 现代药理研究 之可康所含的成分白黎芦醇、白黎芦醇葡萄糖苷:(1)通过影响低密度脂蛋白受体，可降低血清TG及LDL-C;(2)减少大鼠肝脏中 14 C-软脂酸的脂肪合成，减少血清中过氧化脂质及游离脂肪酸，降低AST和ALT的水平。(3)抑制类脂过氧化物堆积，使TG、TC在肝内的沉积减少 [7] 。
从实验结果看，用之可康治疗1个月后，有效地调节了血脂水平，而且降低TG的水平优于辛伐他汀。而辛伐他汀组以TC的下降较为明显，由于辛伐他汀是HMG-CoA还原酶抑制剂，通过对胆固醇生物合成限速酶的特异竞争性抑制，使HMG-CoA不能转变成甲基二羟戊酸，从而阻断胆固醇的合成，降低血胆固醇水平。说明辛伐他汀适用于高胆固醇血症的治疗，之可康适用于高甘油三酯的治疗。越来越多的研究证明，氧化型低密度脂蛋白是造成动脉粥样硬化主要因素，防止LDL的氧化，是防治动脉粥样硬化性疾病发生的有效途径。实验结果显示之可康和联合治疗组均可逆转动脉硬化，推测其机制可能是之可康抑制了LDL的氧化修饰 [8] ，表明之可康具有保护内皮细胞的作用。之可康调节血脂的同时，还能逆转脂肪肝。表明之可康通过抑制肝细胞脂质过氧化反应，稳定了生物膜，使肝细胞变性和坏死减轻，从而能迅速恢复肝细胞的功能。实验还显示了辛伐他汀逆转脂肪肝作用不明显，因为他汀类药物最重要的副作用就是对肝脏和肌肉的毒性，对于所有他汀类药物来说，转氨酶增高超过3倍(正常上限)的发生率大约是1%，而且与剂量相关 [9] ，有文献报道，辛伐他汀加大剂量会增加对肝功能的影响 [10] 。因此，辛伐他汀不能改善血脂异常形成的脂肪肝。
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实验结果证实，减半剂量联合使用之可康和辛伐他汀，通过不同的调脂环节，可产生协同的调脂作用，优于单一使用之可康或辛伐他汀治疗组;联合用药减少了辛伐他汀的 剂量，避免了其对肝脏的不良影响，也使得联合用药组逆转脂肪肝的效果明显。由于这是在大鼠血脂异常模型上进行的实验研究，与人类疾病的病理机制有一定差距，用此来评价调脂、保肝药物的疗效有一定的局限性，但可以为今后在临床上进行中西药联合治疗血脂异常，提供思路和理论依据。
综上所述，之可康与辛伐他汀(各半量)联合应用，调脂、保肝的效果优于单一用药，适宜于混合型血脂异常和长期治疗，也可用于动脉粥样硬化的二级预防。
参考文献
1 徐淑云.药理实验方法学.北京:人民卫生出版社，1982，781-783.
2 张秀锦.高胆固醇血症治疗的理论与实践.临床荟萃，1999，14(23):1098.
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3 血脂治疗现状调查协作组.中华心血管病杂志，2001，29(1):16-17.
4 Gotto AM.Lipid lowering，regression and coronary event.Circulation，1995，92:646-656.
5 徐成斌.血脂异常的药物治疗新进展.中华心血管病杂志，2001，29(3):189.
6 陈建维.活血通脉胶囊治疗高脂血症70例疗效观察.实用中西医结合杂志，1991，(3):174.
7 张振涛.白藜芦醇及其衍生物对脂质体膜氧化稳定性研究.生物化学杂志，1993，9(2):254-255.
8 骆苏芳.虎杖有效成分3，4′，5-三羟基-3-β-D-葡萄糖苷的研究进展.中国药理学与毒理学杂志，1999，13(1):1-1.
9 David J，Maron，MD，Sergio Fazio，MD，phD;MacRaae F.Linton，MD.他汀类药物的当代展望.中国血脂网.
10 宦鹏年.辛伐他汀与氟伐他汀调脂疗效的比较.国外医学·心血管疾病分册，2001，28(3):165.
作者单位:030001山西医科大学第二医院
(编辑小 川), http://www.100md.com(李)
关键词 大鼠血脂异常 脂肪肝 之可康 辛伐他汀
, 百拇医药
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2004)02-0101-03
The experimental study on the influence of the ZhiKeKang，Simvastatin
and their combined application upon the rat model with dyslipidemia
Li Ping，Li Xiaogang
The Second Hospital，Shanxi Medical University，Shanxi030001.
【Abstract】 Objective On the basis of building rat model with dyslipidemia，we treat the rats with ZhiKeKang(ZKK)，Simvastatin and the both，to evaluate the regulative effect to blood lipid of the Chinese medicine-zkk，and the influence on the blood vessel and liver，meanwhile，to find out a better therapy fordyslipidemia.Methods Dividing at random40rats into5groups，namely the group of normal lipidemia，of model with dyslipidemia and three groups of treatment with ZKK，Simvastatin and the both.Examining the values of TC，TG，LDL-C，ALT，AST in the serum and that of TC，TG in the liver，meanwhile observing the pathological change of the liver and abdominal aorta by naked eyes and microscpe.Results The blood lipid value in the treatment groups is significantly different from that before treatˉing.In the group of treatment with ZKK，the AST，ALT and the lipid in the liver decrease significantly and differ from the natural recovery group’sbut the normal group’s.In the group of treament with Simvastatin，the affection to the ALT，AST and the lipid in liver is no apparent，there is no difference campared to that of recovery group，but very difˉferent from that of treatment group with ZKK，In the combined treatment group，the effect to decrease the bloodlipid is significant，the influence on liver is similar to the ZKK’s.Conclusion Rich-fat food can induce dyslipidemia，atheromatous patch and hepar adiposum.ZKK can effectively regulate dyslipidemia and protect the liver’s function.The combined application of ZKK and Simvastatin(half dose of the both)is more effective in treating dyslipidemia and decreasing the damage to the liver.
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Key words rat dyslipidemia fatty liver ZhiKeKang simvastatin
本文在建立血脂异常、脂肪肝动物模型基础上，选用中药之可康(又称虎杖片)与辛伐他汀进行对比研究，来评价之可康的调脂作用，并观察二者联合使用是否能协同降脂及拮抗辛伐他汀损肝的毒副作用，探索一种中西药物结合治疗血脂异常的最佳方案。
1 材料与方法
1.1 实验动物 由山西医科大学动物中心提供40只8周龄、体重(20±13)g健康清洁级雄性Wistar大鼠，随机分为5组，每组8只;室温控制在(23±2)℃，相对湿度60%。
1.2 方法 (1)正常组(Normal组):以普通饲料喂养3个月;(2)血脂异常脂肪肝模型组(Model组):以高脂饲料喂养大鼠2个月，之后以普通饲料喂养1个月。(3)3个治疗组(Treat组):以高脂饲料喂养2个月，造模成功后改用普通饲料喂养的同时，每日上午8时灌喂药物一次，持续1个月。Treat 1 组:2.5mg·kg -1 ·d -1 辛伐他汀;Treat 2 组:0.82g·kg -1 ·d -1 之可康;Treat 3 组:两种药物以上述剂量减半。所有大鼠在实验3个月末，末次给药后禁食12h，经内眦静脉采血1.5～2ml，3000rpm离心20min，测定血清TC、TG、HDL、LDL、AST、ALT;3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，取腹主动脉将其纵行切开，观察是否形成脂质沉积斑块;取肝脏肉眼观察其形态;腹主动脉、肝脏组织用10%福尔马林固定，横切成三块，常规石蜡包埋切片，HE染色观察病理学变化;取肝脏的一叶 [1] ，除去附着的脂肪及其它组织，扭力天平称重，电动匀浆器研成匀浆，按每克样本用9ml的比例加入氯仿-甲醛混合液(2:1)，离心沉淀取上清液5～10ml，用显色法测定胆固醇、甘油三酯含量(mg/g)。
, http://www.100md.com
1.3 统计学方法 采用SPSS8.0版本进行统计学处理。血脂、转氨酶、肝脏脂质的测定值以ˉx±s表示，均数间比较采用单因素方差分析，两两间比较采用q检验;P<0.05为有统计学意义。
2 实验结果
2.1 药物治疗对大鼠血清脂质的影响 见表1。模型组与正常组比较，各项指标差异具有显著性。说明模型制作成功。TC:之可康组与基余四组相比均有差异;联合组与正常组、辛伐他汀组比无差异。TG:之可康组、联合组与正常组比均无差异;与辛伐他汀组比均有差异。HDL、LDL:3个治疗组之间两两比以及分别与正常组比均无差异。
2.2 药物治疗对大鼠肝脏脂质及转氨酶的影响 见表2。模型组与正常组比较，AST、LTC、LTG差异有显著性，ALT差异不显著。AST、ALT、LTC、LTG:正常组、之可康组、联合组两两比较均无差异;分别与模型组、辛伐他汀组比均有差异。
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表1 药物治疗对大鼠血清脂质的影响
注:与Normal组比较， P<0.05， P<0.01;与Model组比较， P<0.05，P<0.01;与Treat 1 组比较， P<0.05， P<0.01;与Treat 2 组比较， P<0.05;下同
表2 药物治疗对大鼠肝脏脂质及转氨酶的影响
2.3 饲养3个月末的大鼠血管及肝脏的形态学改变 腹主动脉:正常组内膜光滑;模型组内膜可见淡黄色条纹，宽1～2mm，长度不等，有微隆起的斑块;光镜下:内膜有大量泡沫细胞，有泡沫细胞裂解，脂质类物质游离于细胞外。3个治疗组内膜光滑，镜下偶见泡沫细胞。肝脏:正常组外形、色泽均正常;镜下见肝小叶结构完整清晰，肝索排列整齐。模型组:体积增大、色泽黄腻;光镜下肝细胞体积增大，胞内有大量脂肪空泡。辛伐他汀组肝脏同模型组。之可康组与联合用药组肝脏基本同正常组。
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3 讨论
3.1 血脂异常 指由于脂肪代谢或运转异常使血中的TC、TG、LDL-C增高及HDL-C降低，它在动脉粥样硬化及其心血管事件的发生发展中起重要的作用。最具影响力的北欧辛伐他汀生存研究(4S试验)，证实了应用降胆固醇药物作长期治疗，使得总死亡率降低30%，冠心病危险率降低42%。国外大病例数的流行病学调查及心脏研究结果还证实，血TG增高也是发生心肌梗死的独立危险因素，因 此，血脂异常患者应接受调脂治疗 [2] 。当前治疗中存在3个问题:(1)长期以来调脂的主要目标是降低TC，而高TG的治疗研究较少;(2)调脂药一般都需长期服用，但目前较有效的调脂药大多对肝功能有影响，如降TC的代表药他汀类药物;(3)单一用药，难以达到预期的调脂目标值 [3] 。所以，探讨安全有效的调脂药物以及合理的联合用药方案是临床上应该考虑的问题。
3.2 建立模型 用大鼠建立血脂异常、AS及脂肪肝模型，有饲养方便，抵抗力强，食性与人相近优点。特别是形成的病理改变与人早期相似，便于进行调脂药物疗效及机制探讨 [4，5] 。
, http://www.100md.com
3.3 中医观点 中医认为，血脂异常是由痰浊滞留，瘀血阻络，肝失疏泄，脂质沉积于血管、肝脏而发病 [6] 。之可康是以天然虎杖为主要原料，有缓泻利尿、通经、去瘀、解毒等功效，通过化痰、活血、健脾、补肾可以调节血脂、保护肝脏。
3.4 现代药理研究 之可康所含的成分白黎芦醇、白黎芦醇葡萄糖苷:(1)通过影响低密度脂蛋白受体，可降低血清TG及LDL-C;(2)减少大鼠肝脏中 14 C-软脂酸的脂肪合成，减少血清中过氧化脂质及游离脂肪酸，降低AST和ALT的水平。(3)抑制类脂过氧化物堆积，使TG、TC在肝内的沉积减少 [7] 。
从实验结果看，用之可康治疗1个月后，有效地调节了血脂水平，而且降低TG的水平优于辛伐他汀。而辛伐他汀组以TC的下降较为明显，由于辛伐他汀是HMG-CoA还原酶抑制剂，通过对胆固醇生物合成限速酶的特异竞争性抑制，使HMG-CoA不能转变成甲基二羟戊酸，从而阻断胆固醇的合成，降低血胆固醇水平。说明辛伐他汀适用于高胆固醇血症的治疗，之可康适用于高甘油三酯的治疗。越来越多的研究证明，氧化型低密度脂蛋白是造成动脉粥样硬化主要因素，防止LDL的氧化，是防治动脉粥样硬化性疾病发生的有效途径。实验结果显示之可康和联合治疗组均可逆转动脉硬化，推测其机制可能是之可康抑制了LDL的氧化修饰 [8] ，表明之可康具有保护内皮细胞的作用。之可康调节血脂的同时，还能逆转脂肪肝。表明之可康通过抑制肝细胞脂质过氧化反应，稳定了生物膜，使肝细胞变性和坏死减轻，从而能迅速恢复肝细胞的功能。实验还显示了辛伐他汀逆转脂肪肝作用不明显，因为他汀类药物最重要的副作用就是对肝脏和肌肉的毒性，对于所有他汀类药物来说，转氨酶增高超过3倍(正常上限)的发生率大约是1%，而且与剂量相关 [9] ，有文献报道，辛伐他汀加大剂量会增加对肝功能的影响 [10] 。因此，辛伐他汀不能改善血脂异常形成的脂肪肝。
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实验结果证实，减半剂量联合使用之可康和辛伐他汀，通过不同的调脂环节，可产生协同的调脂作用，优于单一使用之可康或辛伐他汀治疗组;联合用药减少了辛伐他汀的 剂量，避免了其对肝脏的不良影响，也使得联合用药组逆转脂肪肝的效果明显。由于这是在大鼠血脂异常模型上进行的实验研究，与人类疾病的病理机制有一定差距，用此来评价调脂、保肝药物的疗效有一定的局限性，但可以为今后在临床上进行中西药联合治疗血脂异常，提供思路和理论依据。
综上所述，之可康与辛伐他汀(各半量)联合应用，调脂、保肝的效果优于单一用药，适宜于混合型血脂异常和长期治疗，也可用于动脉粥样硬化的二级预防。
参考文献
1 徐淑云.药理实验方法学.北京:人民卫生出版社，1982，781-783.
2 张秀锦.高胆固醇血症治疗的理论与实践.临床荟萃，1999，14(23):1098.
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3 血脂治疗现状调查协作组.中华心血管病杂志，2001，29(1):16-17.
4 Gotto AM.Lipid lowering，regression and coronary event.Circulation，1995，92:646-656.
5 徐成斌.血脂异常的药物治疗新进展.中华心血管病杂志，2001，29(3):189.
6 陈建维.活血通脉胶囊治疗高脂血症70例疗效观察.实用中西医结合杂志，1991，(3):174.
7 张振涛.白藜芦醇及其衍生物对脂质体膜氧化稳定性研究.生物化学杂志，1993，9(2):254-255.
8 骆苏芳.虎杖有效成分3，4′，5-三羟基-3-β-D-葡萄糖苷的研究进展.中国药理学与毒理学杂志，1999，13(1):1-1.
9 David J，Maron，MD，Sergio Fazio，MD，phD;MacRaae F.Linton，MD.他汀类药物的当代展望.中国血脂网.
10 宦鹏年.辛伐他汀与氟伐他汀调脂疗效的比较.国外医学·心血管疾病分册，2001，28(3):165.
作者单位:030001山西医科大学第二医院
(编辑小 川), http://www.100md.com(李)