黄蜀葵花中金丝桃苷及总黄酮的含量测定
【摘要】 目的 研究黄蜀葵花中金丝桃苷及总黄酮含量的测定。方法 应用薄层—紫外分光光度法测定了黄蜀葵花中金丝桃苷及总黄酮的含量。结果 金丝桃苷回收率为96.65%，RSD为1.83%。结论 该法准确可靠，为该药材的鉴定和质检提供了依据。
关键词 黄蜀葵花 金丝桃苷 总黄酮
【文献标识码】 B 【文章编号】 1606-8106(2003)15-2355-02
黄蜀葵花为锦葵科秋葵属Abelmoschus manihot的干燥花，具有消炎镇痛作用。《嘉佑本草》记载，花主治小便淋漓及催生，治诸恶疮。民间用以治疗疔疮、腮腺炎、尿路感染、肺热止咳及烧烫伤等。临床应用黄蜀葵花及总黄酮治疗多种口腔炎症、慢性支气管炎、止痛效果显著。关于化学成分王先荣等从黄蜀葵花酒精浸膏中分离出五种黄酮类成分并鉴定为金丝桃苷、槲皮素-3-洋槐糖苷、槲皮素-3′-葡萄糖苷、槲皮素和杨梅素 [1] 。黄泉秀等以芦丁为对照品测定黄蜀葵花中黄酮类化合物的含量 [2] 。本文采用薄层—紫外分光光度法测定黄蜀葵花中金丝桃苷及总黄酮的含量 [3，4] ，操作简便，结果稳定，为该药材的鉴定和质检提供了依据。
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1 仪器与材料
UV-260紫外分光光度计(日本岛津);AS5150A超声提取器(奥特赛恩斯仪器有限公司);752-紫外光栅分光光度计(上海第三分析仪器厂)。聚酰胺薄膜20cm×20cm(浙江台州市路桥四青生化材料厂)。黄蜀葵花干燥花(江苏省苏中制药厂)。金丝桃苷对照品由本研究室提供，经光谱鉴定。
2 样品溶液的制备
2.1 供试品溶液 精密称取干燥黄蜀葵花粉末(40目)0.5g，加95%乙醇10ml回流提取1h，抽滤，用乙醇洗至无色，提取液浓缩并定容至10ml，作为供试品溶液。
2.2 对照品溶液 精密称取金丝桃苷对照品10.00mg，加95%乙醇溶解并定容至50ml，制成0.2mg/ml的溶液作为对照品溶液。
3 方法
, 百拇医药
3.1 测定波长的选择 吸取对照品溶液1.0ml于25ml容量瓶中，用95%乙醇定容并摇匀，室温下于200～450nm波长范围扫描，结果见图1。选定最大吸收波长为364nm。
3.2 标准曲线的绘制 精密吸取对照品溶液1.0ml于25ml容量瓶中，用95%乙醇定容并摇匀。再精密吸取稀释液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml置10ml容量瓶中，用95%乙醇定容并摇匀，于测定波长下测定吸收度，得回归方程:C(mg/ml)=11.6429A-0.09632，r=0.9996。
3.3 稳定性实验 以金丝桃苷对照品溶液试验，对同一浓度对照品溶液每隔30min于测定波长下测定吸收度1次，结果在3h内吸收度稳定，其RSD=2.14%。
3.4 精密度实验 取对照品溶液5份各1.0ml，按上述条件测定吸收度，结果RSD=0.5%，表明精密度较好。
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3.5 金丝桃苷含量测定 在聚酰胺板上点供试品溶液及对照品溶液各50μl，以乙酸乙酯:甲醇(1∶2)为展开剂上行 展开，挥干溶剂后于紫外灯下定位，R f 值约为0.51，层析图谱见图2。刮剪下待测成分条斑于10ml具塞离心试管中，用95%乙醇于50℃水浴上洗脱3次(2、2、1ml和30、20、10min)，合并洗脱液于10ml容量瓶中，用洗脱剂定容，摇匀。同法制备空白溶液，于测定波长下测定吸收度，根据回归方程计算含量，结果见表1。
图1 金丝桃苷吸收光谱图
图2 薄层层析图谱1金丝桃苷对照品;2黄蜀葵花提取液
3.6 回收率实验 在同一薄板上分别点供试品溶液和对照品溶液，按样品含量测定项下方法展开，洗脱，测定，计算金丝桃苷含量，结果平均回收率为96.95%，RSD为1.83%(n=4)。
3.7 总黄酮的含量测定 精密称取干燥的药材粉末0.5g置具塞锥形瓶中，加入60ml95%乙醇，放置24h后超声提取20min，提取液置100ml容量瓶中，以95%乙醇定容，摇匀。得黄酮类化合物提取液。
, 百拇医药
取上述提取液1.0ml于25ml容量瓶中，用95%乙醇定容，摇匀，于364nm处测定吸收度，由回归方程计算总黄酮含量。结果见表2。
表1 金丝桃苷的含量测定
表2 总黄酮的含量测定
3.8 回收率实验 分别吸取对照品溶液1、10.0、20.0、30.0、40.0μl于5个5ml容量瓶中，各加入70.0μl黄酮类提取液，再加入95%乙醇定容，摇匀。按上法测定吸收度并计算总黄酮的含量，结果平均回收率为95.92%，RSD为0.98%(n=4)。
4 小结
金丝桃苷在聚酰胺薄膜上不易洗脱完全，影响紫外分光光度法进行定量，本文根据黄酮类化合物的结构特点，用95%乙醇在50℃下分3次进行洗脱，结果满意。本法简便易行，可作为药物中金丝桃苷成分鉴定和定量的参考。
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参考文献
1 王先荣，王兆全，李颖，等.黄蜀葵花的化学成分研究.植物学报，1981，23(3):222.
2 黄泉秀，何亚维，彭国平，等.比色法测定黄蜀葵花中黄酮类化合物的含量.中药材，1990，13(12):36.
3 李星海，王军宪，唐有明，等.鹿蹄草中金丝桃苷及总黄酮的含量测定.中药材，1994，17(3):36.
4 李星海，王军宪，徐文友，等.秦岭三种金丝桃属植物药中金丝桃苷的含量测定.西北药学杂志，1994，9(1):18.
作者单位:710061西安交通大学药学院
(编辑李年令), http://www.100md.com(杨燕子)
关键词 黄蜀葵花 金丝桃苷 总黄酮
【文献标识码】 B 【文章编号】 1606-8106(2003)15-2355-02
黄蜀葵花为锦葵科秋葵属Abelmoschus manihot的干燥花，具有消炎镇痛作用。《嘉佑本草》记载，花主治小便淋漓及催生，治诸恶疮。民间用以治疗疔疮、腮腺炎、尿路感染、肺热止咳及烧烫伤等。临床应用黄蜀葵花及总黄酮治疗多种口腔炎症、慢性支气管炎、止痛效果显著。关于化学成分王先荣等从黄蜀葵花酒精浸膏中分离出五种黄酮类成分并鉴定为金丝桃苷、槲皮素-3-洋槐糖苷、槲皮素-3′-葡萄糖苷、槲皮素和杨梅素 [1] 。黄泉秀等以芦丁为对照品测定黄蜀葵花中黄酮类化合物的含量 [2] 。本文采用薄层—紫外分光光度法测定黄蜀葵花中金丝桃苷及总黄酮的含量 [3，4] ，操作简便，结果稳定，为该药材的鉴定和质检提供了依据。
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1 仪器与材料
UV-260紫外分光光度计(日本岛津);AS5150A超声提取器(奥特赛恩斯仪器有限公司);752-紫外光栅分光光度计(上海第三分析仪器厂)。聚酰胺薄膜20cm×20cm(浙江台州市路桥四青生化材料厂)。黄蜀葵花干燥花(江苏省苏中制药厂)。金丝桃苷对照品由本研究室提供，经光谱鉴定。
2 样品溶液的制备
2.1 供试品溶液 精密称取干燥黄蜀葵花粉末(40目)0.5g，加95%乙醇10ml回流提取1h，抽滤，用乙醇洗至无色，提取液浓缩并定容至10ml，作为供试品溶液。
2.2 对照品溶液 精密称取金丝桃苷对照品10.00mg，加95%乙醇溶解并定容至50ml，制成0.2mg/ml的溶液作为对照品溶液。
3 方法
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3.1 测定波长的选择 吸取对照品溶液1.0ml于25ml容量瓶中，用95%乙醇定容并摇匀，室温下于200～450nm波长范围扫描，结果见图1。选定最大吸收波长为364nm。
3.2 标准曲线的绘制 精密吸取对照品溶液1.0ml于25ml容量瓶中，用95%乙醇定容并摇匀。再精密吸取稀释液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml置10ml容量瓶中，用95%乙醇定容并摇匀，于测定波长下测定吸收度，得回归方程:C(mg/ml)=11.6429A-0.09632，r=0.9996。
3.3 稳定性实验 以金丝桃苷对照品溶液试验，对同一浓度对照品溶液每隔30min于测定波长下测定吸收度1次，结果在3h内吸收度稳定，其RSD=2.14%。
3.4 精密度实验 取对照品溶液5份各1.0ml，按上述条件测定吸收度，结果RSD=0.5%，表明精密度较好。
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3.5 金丝桃苷含量测定 在聚酰胺板上点供试品溶液及对照品溶液各50μl，以乙酸乙酯:甲醇(1∶2)为展开剂上行 展开，挥干溶剂后于紫外灯下定位，R f 值约为0.51，层析图谱见图2。刮剪下待测成分条斑于10ml具塞离心试管中，用95%乙醇于50℃水浴上洗脱3次(2、2、1ml和30、20、10min)，合并洗脱液于10ml容量瓶中，用洗脱剂定容，摇匀。同法制备空白溶液，于测定波长下测定吸收度，根据回归方程计算含量，结果见表1。
图1 金丝桃苷吸收光谱图
图2 薄层层析图谱1金丝桃苷对照品;2黄蜀葵花提取液
3.6 回收率实验 在同一薄板上分别点供试品溶液和对照品溶液，按样品含量测定项下方法展开，洗脱，测定，计算金丝桃苷含量，结果平均回收率为96.95%，RSD为1.83%(n=4)。
3.7 总黄酮的含量测定 精密称取干燥的药材粉末0.5g置具塞锥形瓶中，加入60ml95%乙醇，放置24h后超声提取20min，提取液置100ml容量瓶中，以95%乙醇定容，摇匀。得黄酮类化合物提取液。
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取上述提取液1.0ml于25ml容量瓶中，用95%乙醇定容，摇匀，于364nm处测定吸收度，由回归方程计算总黄酮含量。结果见表2。
表1 金丝桃苷的含量测定
表2 总黄酮的含量测定
3.8 回收率实验 分别吸取对照品溶液1、10.0、20.0、30.0、40.0μl于5个5ml容量瓶中，各加入70.0μl黄酮类提取液，再加入95%乙醇定容，摇匀。按上法测定吸收度并计算总黄酮的含量，结果平均回收率为95.92%，RSD为0.98%(n=4)。
4 小结
金丝桃苷在聚酰胺薄膜上不易洗脱完全，影响紫外分光光度法进行定量，本文根据黄酮类化合物的结构特点，用95%乙醇在50℃下分3次进行洗脱，结果满意。本法简便易行，可作为药物中金丝桃苷成分鉴定和定量的参考。
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参考文献
1 王先荣，王兆全，李颖，等.黄蜀葵花的化学成分研究.植物学报，1981，23(3):222.
2 黄泉秀，何亚维，彭国平，等.比色法测定黄蜀葵花中黄酮类化合物的含量.中药材，1990，13(12):36.
3 李星海，王军宪，唐有明，等.鹿蹄草中金丝桃苷及总黄酮的含量测定.中药材，1994，17(3):36.
4 李星海，王军宪，徐文友，等.秦岭三种金丝桃属植物药中金丝桃苷的含量测定.西北药学杂志，1994，9(1):18.
作者单位:710061西安交通大学药学院
(编辑李年令), http://www.100md.com(杨燕子)