土牛膝多糖抗炎镇痛作用的研究(2)
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参见附件。
2.2.2 醋酸扭体法研究土牛膝多糖的镇痛作用 取ICR雌性小鼠50只，随机分为 5组，每组 10只，分别为土牛膝多糖低、中、高剂量组，空白组，阳性对照组。灌胃给药，空白对照组给以生理盐水0.2mL每只，阳性对照组给以阿司匹林4mg每只，低剂量组给以土牛膝多糖1.5mg每只，中剂量组给以土牛膝多糖2.5mg每只，高剂量组给以土牛膝多糖4mg每只。连续给药5天，与末次给药后50min时每只小鼠按体重每10g腹腔注射0.6%醋酸生理盐水溶液0.15mL，将后肢伸展、腹部收缩、臀部抬高、躯干扭曲(扭体)，作为疼痛指标。观察15min小鼠的扭体次数。然后计算镇痛百分率。
镇痛百分率%＝
空白对照组平均扭体数-给药组平均扭体数空白对照组平均扭体数×100%
2.3 土牛膝多糖抗炎作用的研究
2.3.1 土牛膝多糖对二甲苯致小鼠耳壳炎症的影响 取ICR雌性小鼠50只，随机分为 5组，每组 10只，分别为土牛膝多糖低、中、高剂量组，空白组，阳性对照组。灌胃给药，空白对照组给以生理盐水0.2mL每只，阳性对照组给以阿司匹林4mg每只，低剂量组给以土牛膝多糖1.5mg每只，中剂量组给以土牛膝多糖2.5mg每只，高剂量组给以土牛膝多糖4mg每只。连续给药5天，与末次给药后50min时每只小鼠右耳涂二甲苯20μL，1h后处死小鼠，剪下双耳。用直径8mm的不锈钢打孔器在双耳对称处冲下耳片，在电子分析天平上称重。以左右耳片重量差为肿胀度，计算各组肿胀度平均值，计算耳肿胀抑制率。
耳肿胀抑制率%＝
空白对照组平均肿胀率-给药组平均肿胀率空白对照组平均肿胀数×100%
2.3.2 土牛膝多糖对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响 取ICR雌性小鼠50只，随机分为 5组，每组 10只，分别为土牛膝多糖低、中、高剂量组，空白组，阳性对照组。灌胃给药，空白对照组给以生理盐水0.2mL每只，阳性对照组给以阿司匹林4mg每只，低剂量组给以土牛膝多糖1.5mg每只，中剂量组给以土牛膝多糖2.5mg每只，高剂量组给以土牛膝多糖4mg每只。连续给药5天，与末次给药后0.5h，尾静脉注射0.5%伊文思蓝生理盐水溶液 0.1 mL/10g体重，10 min后腹腔注射0.7%冰醋酸生理盐水0.3mL/10 g， 20min将小鼠脱颈椎处死，腹腔注射生理盐水5 mL/只，轻揉腹部，使腹腔内液体充分混匀后，用镊子镊住并提高后腹部腹壁，剪一小孔，吸取腹腔液，1000r/m离心5 min，取上清液，以生理盐水为空白，做全波长扫描，发现在610nm有最大的吸收峰见图1，故在610nm测定吸光度。计算给药组与正常对照组的差异显著性。按以下公式计算土牛膝多糖对醋酸引起的毛细血管通透性增加的抑制率。
抑制率%＝
空白对照组平均吸光度-给药组平均吸光度空白对照组平均吸光度×100%
2.4 数据处理
实验数据采用均数±标准差(±s)表示，组间比较采用t检验。
3 实验结果
3.1 土牛膝多糖对小鼠疼痛的影响(热板法)
实验结果见表1，土牛膝多糖在在给药后30min和60min能提高小鼠热刺激的痛阈值，但没有呈现一定的量效关系。而阿司匹林在给药后15min与30min都能显著提高小鼠热刺激的痛阈值，但阳性对照药在给药后15min时效果最佳，而土牛膝多糖在给药30min效果最佳。
3.2 土牛膝多糖对小鼠疼痛的影响(扭体法)
如表2所示，土牛膝多糖不同剂量组均有一定的镇痛作用，且土牛膝多糖高剂量组的作用效果与阳性对照药阿司匹林相当。
3.3 土牛膝多糖对小鼠耳廓肿胀的影响
由表3可见，土牛膝多糖高、中、低剂量组对二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀有明显的抑制作用，而且呈现一定的量效关系。而且，从表中的数据可以发现，土牛膝多糖高、中剂量组的效果均优于阳性对照药阿司匹林的抑制效果。
3.4 土牛膝多糖对鼠腹腔毛细血管通透性的影响
从表4的结果来看，土牛膝多糖高、中、低剂量组对醋酸引起的小鼠毛细血管通透性增加均具有一定的抑制作用，但高剂量组的效果不如低剂量组。
4 讨 论
本研究采用热板法、醋酸扭体法对土牛膝多糖的镇痛作用进行了研究，采用小鼠耳廓肿胀法、腹腔毛细血管通透性试验对土牛膝多糖的抗炎作用进行了研究。热板法和醋酸扭体法是两种用于研究镇痛药外周镇痛活性和中枢镇痛活性常用的方法[3]，本实验的研究结果表明土牛膝多糖具有一定的外周镇痛活性和中枢镇痛活性。但在热板法中，给药15min后效果不显著，而给药30min后才显示出显著的镇痛作用，这可能是由于中药口服给药后，起效较慢的缘故，但这还需进一步研究来证实。
炎症是机体中具有血管系统的活体组织对局部损伤所发生的一种以防御为主的组织反应[4]。其基本病理变化为局部组织、细胞的变质、渗出和增生三种变化，二甲苯是非特异性致炎因子,可引起以血管通透性、白细胞游走为主要变化的急性炎症[5]。土牛膝多糖能显著抑制二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀，对醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增加也具有较好的抑制作用，表明其具有抗急性炎症的作用。本实验研究结果表明，土牛膝多糖抗炎镇痛作用效果好，可以为浙江土牛膝的进一步开发利用奠定实验基础。土牛膝资源丰富，民间已广泛应用。该药的开发利用，将造福于人类。
参考文献 ......
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