分析叶酸代谢相关酶基因多态性与不良孕产的临床关系(1)
【摘要】 目的 探討叶酸代谢相关酶基因多态性与不良孕产的临床关系。方法 80例不良孕产妇女作为不良孕产组， 80例正常生育妇女作为正常组。采集两组妇女的口腔黏膜上皮细胞提取基因组DNA， 以聚合酶链式反应(PCR)技术进行基因多态性检测。观察两组妇女的基因型分布特点， 并就其与不良孕产之间的关系展开分析。结果 不良孕产组妇女亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T位点的TT突变纯合型、A1298C位点的CC突变纯合型， 甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)基因A66G位点GG突变纯合型基因频率(47.50%、12.50%、18.75%)均高于正常组(21.25%、3.75%、7.50%)， 差异均有统计学意义(P<0.05)。不良孕产组妇女MTHFR基因C677T位点的CC野生纯合型、A1298C位点的AA野生纯合型， MTRR基因A66G位点的AA野生纯合型基因频率(21.25%、50.00%、41.25%)均低于正常组(36.25%、66.25%、58.75%)， 差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 叶酸代谢相关酶基因多态性与不良孕产的发生有重要的关联。
【关键词】 亚甲基四氢叶酸还原酶；基因多态性；不良孕产；代谢相关酶
DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.16.042
叶酸是一种水溶性维生素， 也是我们常说的维生素B9， 可以治疗女性贫血， 更是预防胎儿神经管畸形的重要物质。叶酸在体内需要经过多重酶的催化才具有代谢活性， 其中关键的MTHFR、MTRR等酶的基因位点多态性会导致酶的活性降低， 从而造成叶酸代谢障碍， 引发一系列的疾病[1]。近年来， 临床上针对叶酸代谢机制的研究越来越多， 很多研究指出[2]， 一部分妇女因叶酸代谢相关酶基因多态性导致不良孕产情况。本次研究以本院收集的160例妇女为研究对象， 探讨叶酸代谢相关酶基因多态性与不良孕产的临床关系。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 选取本院2014年12月～2016年12月收治的80例不良孕产妇女作为不良孕产组， 同期在本院检查的80例正常生育妇女作为正常组。160例妇女年龄20～40岁， 平均年龄(30.4±4.5)岁；既往发生过48例习惯性流产、36例胎停、44例死胎、32例生育神经管缺陷患儿；46例生育1次， 114例生育1次以上。排除意识障碍、外感染、解剖学因素、福气双方染色体异常者， 本次研究由患者及其家属签署同意书。
1. 2 方法
1. 2. 1 设备与试剂 采用PCR分析仪ABI7500， 采用的PCR试剂、引物均由美国ABI公司提供， DNA提取试剂盒购于德国Qiagen公司。叶酸代谢障碍相关的单核苷酸基因多态性位点包括MTHFR C677T、MTHFR A1298C、MTRR A66G， 反应所用的基因多肽位点引物信息， MTHFR C677T上游引物：5'-GAA AAG CTG CGT GAT GAT G-3'， 下游引物5'-TTG AAG GAG AAG GTA TC-3'；MTHFR A1298C上游引物：5'-AAG AAC GAA GAC TTA AAA-3'， 下游引物：5'-TGG GGG GAG GAG CTG AC-3'； MTRR A66G上游引物：5'-AGG CAA AGG CCA TCG CA-3'， 下游引物：5‘-ATC CAT GTA CCA CAG CTT-3'[3]。
1. 2. 2 DNA提取 采集两组妇女的口腔黏膜上皮细胞， 用柱式抽提试剂盒抽提样本DNA， 采用基因测序技术检测叶酸代谢相关酶MTHFR C677T、MTHFR A1298C、MTRR A66G的基因多态性。每个反应体系包括1 μl 20 ng/μl DNA模板， 5 μl 2×MasterMix， 0.5 μl 20×引物， 3.5 μl去水离子。每个反应体系的总体积为10 μl， 以95℃反应10 min， 后以92℃反应15 s， 60℃反应1 min， 以此进行20个循环后， 以89℃反应15 s， 60℃反应90 s再进行30个循环。结束后进行基因测序， 确定两组妇女基因分型[4]。
1. 3 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件处理数据。计数资料以率(%)表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
不良孕产组妇女MTHFR基因C677T位点的TT突变纯合型、A1298C位点的CC突变纯合型， MTRR基因A66G位点GG突变纯合型基因频率(47.50%、12.50%、18.75%)均高于正常组(21.25%、3.75%、7.50%)， 差异均有统计学意义(P<0.05)。不良孕产组妇女MTHFR基因C677T位点的CC野生纯合型、A1298C位点的AA野生纯合型， MTRR基因A66G位点的AA野生纯合型基因频率(21.25%、50.00%、41.25%)均低于正常组(36.25%、66.25%、58.75%)， 差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。
3 讨论
随着近年来临床上针对叶酸代谢相关基因的多态性与出生缺陷、不良妊娠的关系的研究扩大， 国内外针对育龄妇女叶酸代谢相关酶基因多态性的研究逐渐引起关注。MTHFR和MTRR是叶酸代谢过程中关键的酶， 前者能够起到催化N5、N10-亚甲基四氢叶酸转化为N5-甲基四氢叶酸的作用， 后者可作为甲基供体， 在MTRR的催化下广泛参与到体内的甲基化反应中[5]。有研究指出， 叶酸代谢酶的活性降低， 可能导致同型半胱氨酸不能顺利转化为甲硫氨酸， 从而促使血浆中叶酸水平降低， 同型半胱氨酸浓度升高。这样一来， 就容易引起患者血管内皮细胞损伤和功能异常， 血小板粘附和聚集被激活， 引起胎盘血栓性病变[6]。, http://www.100md.com(陆继红 施晓艳 万金华)
【关键词】 亚甲基四氢叶酸还原酶；基因多态性；不良孕产；代谢相关酶
DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.16.042
叶酸是一种水溶性维生素， 也是我们常说的维生素B9， 可以治疗女性贫血， 更是预防胎儿神经管畸形的重要物质。叶酸在体内需要经过多重酶的催化才具有代谢活性， 其中关键的MTHFR、MTRR等酶的基因位点多态性会导致酶的活性降低， 从而造成叶酸代谢障碍， 引发一系列的疾病[1]。近年来， 临床上针对叶酸代谢机制的研究越来越多， 很多研究指出[2]， 一部分妇女因叶酸代谢相关酶基因多态性导致不良孕产情况。本次研究以本院收集的160例妇女为研究对象， 探讨叶酸代谢相关酶基因多态性与不良孕产的临床关系。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 选取本院2014年12月～2016年12月收治的80例不良孕产妇女作为不良孕产组， 同期在本院检查的80例正常生育妇女作为正常组。160例妇女年龄20～40岁， 平均年龄(30.4±4.5)岁；既往发生过48例习惯性流产、36例胎停、44例死胎、32例生育神经管缺陷患儿；46例生育1次， 114例生育1次以上。排除意识障碍、外感染、解剖学因素、福气双方染色体异常者， 本次研究由患者及其家属签署同意书。
1. 2 方法
1. 2. 1 设备与试剂 采用PCR分析仪ABI7500， 采用的PCR试剂、引物均由美国ABI公司提供， DNA提取试剂盒购于德国Qiagen公司。叶酸代谢障碍相关的单核苷酸基因多态性位点包括MTHFR C677T、MTHFR A1298C、MTRR A66G， 反应所用的基因多肽位点引物信息， MTHFR C677T上游引物：5'-GAA AAG CTG CGT GAT GAT G-3'， 下游引物5'-TTG AAG GAG AAG GTA TC-3'；MTHFR A1298C上游引物：5'-AAG AAC GAA GAC TTA AAA-3'， 下游引物：5'-TGG GGG GAG GAG CTG AC-3'； MTRR A66G上游引物：5'-AGG CAA AGG CCA TCG CA-3'， 下游引物：5‘-ATC CAT GTA CCA CAG CTT-3'[3]。
1. 2. 2 DNA提取 采集两组妇女的口腔黏膜上皮细胞， 用柱式抽提试剂盒抽提样本DNA， 采用基因测序技术检测叶酸代谢相关酶MTHFR C677T、MTHFR A1298C、MTRR A66G的基因多态性。每个反应体系包括1 μl 20 ng/μl DNA模板， 5 μl 2×MasterMix， 0.5 μl 20×引物， 3.5 μl去水离子。每个反应体系的总体积为10 μl， 以95℃反应10 min， 后以92℃反应15 s， 60℃反应1 min， 以此进行20个循环后， 以89℃反应15 s， 60℃反应90 s再进行30个循环。结束后进行基因测序， 确定两组妇女基因分型[4]。
1. 3 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件处理数据。计数资料以率(%)表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
不良孕产组妇女MTHFR基因C677T位点的TT突变纯合型、A1298C位点的CC突变纯合型， MTRR基因A66G位点GG突变纯合型基因频率(47.50%、12.50%、18.75%)均高于正常组(21.25%、3.75%、7.50%)， 差异均有统计学意义(P<0.05)。不良孕产组妇女MTHFR基因C677T位点的CC野生纯合型、A1298C位点的AA野生纯合型， MTRR基因A66G位点的AA野生纯合型基因频率(21.25%、50.00%、41.25%)均低于正常组(36.25%、66.25%、58.75%)， 差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。
3 讨论
随着近年来临床上针对叶酸代谢相关基因的多态性与出生缺陷、不良妊娠的关系的研究扩大， 国内外针对育龄妇女叶酸代谢相关酶基因多态性的研究逐渐引起关注。MTHFR和MTRR是叶酸代谢过程中关键的酶， 前者能够起到催化N5、N10-亚甲基四氢叶酸转化为N5-甲基四氢叶酸的作用， 后者可作为甲基供体， 在MTRR的催化下广泛参与到体内的甲基化反应中[5]。有研究指出， 叶酸代谢酶的活性降低， 可能导致同型半胱氨酸不能顺利转化为甲硫氨酸， 从而促使血浆中叶酸水平降低， 同型半胱氨酸浓度升高。这样一来， 就容易引起患者血管内皮细胞损伤和功能异常， 血小板粘附和聚集被激活， 引起胎盘血栓性病变[6]。, http://www.100md.com(陆继红 施晓艳 万金华)