1 材料与方法

    1. 1 材料 实验细胞：实验用原代胚胎成纤维细胞(MEFs)取自怀孕13.5 d小鼠， 由实验室自行制备。实验试剂：HDMEM(高糖)培养基、0.25%胰蛋白酶、胎牛血清(FBS)购于美国Gibco公司。Realtime-PCR使用的SYBR购于日本TAKARA公司。RNA提取试剂TRIZOL试剂购自赛默飞公司。实验用限制性内切酶、T4连接酶均购于NEB公司。实验所用的Dox、表阿霉素、柔红霉素、伊比达星、Hu和5-Fu均购自Sigma公司。

    1. 2 方法

    1. 2. 1 MEFs细胞制备与培养 首先将怀孕13.5 d的母鼠麻醉， 利用CO2处理母鼠致死后， 剪開腹壁暴露出子宫角。随后取出胚胎将其转移到含有PBS的培养皿中， 洗3遍。洗完后， 用眼科剪刀将组织剪碎， 大约碎块1 mm3。吸出转移到15 ml离心管中， 加入2 ml胰蛋白酶/EDTA在37℃细胞培养箱中孵育大约20 min。用10 ml培养基(含10%FBS)终止胰蛋白酶/EDTA的消化 ......