鲤鱼汤对大鼠心肌缺血再灌注后肾脏损害的研究(1)
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[摘要] 目的 观察鲤鱼汤对大鼠心肌缺血再灌注损伤后肾脏损害的影响，并探讨其作用机制。 方法 Wistar大鼠50只，随机分为对照组(10只)、模型组(20只)、治疗组(20只)，鲤鱼汤治疗组给予鲤鱼汤灌胃，每天1次，连续15 d，对照组及模型组则给予0.9%氯化钠溶液灌胃。利用冠状动脉结扎法建立大鼠的心肌缺血再灌注损伤模型，检测相关生化指标；光镜下观察心、肾的病理变化；ELISA方法检测血清中炎性因子白介素-2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)的浓度。 结果 与对照组相比较，模型组血清中肌酸激酶(CK)、IL-2、IFN-γ明显升高(P < 0.05)，而内生肌酐清除率(Ccr)明显降低(P < 0.01)，血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)未见明显变化；与模型组相比较，治疗组血清中CK、IL-2、IFN-γ明显降低(P < 0.05)，Ccr明显升高(P < 0.01)。 结论 大鼠心肌缺血再灌注损伤对肾脏造成轻微损害，而鲤鱼汤对肾损害具有保护作用，其机制可能与抑制炎性因子IL-2、IFN-γ有关。
[关键词] 心肌再灌注损伤；鲤鱼汤；肾脏损害；IL-2；IFN-γ
[中图分类号] R543.3 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2012)12(c)-0012-03
大量的临床研究表明常见的缺血性心脏病、高血压、感染性心内膜炎等疾病均可造成严重的肾脏损害，而大多数肾病患者均伴有高血压、心功能不全等心血管疾病，表明心血管疾病与肾脏疾病存在着密切的关系[1]。近年来的研究显示：源于鱼蛋白的一些小分子肽不被肠道多种酶系降解，可直接被人体吸收从而发挥降血压、降血脂、调节免疫等作用。有学者从鲤酶解物中提取出血管紧张素转化酶抑制肽、抗氧化活性肽及具有抗炎、抗菌等作用的糖脂类生物活性肽[2]。故本实验在建立了大鼠心肌缺血再灌注损伤模型后，通过观察鲤鱼汤对大鼠心肌缺血再灌注损伤后肾脏损害的影响，探讨其可能的作用机制，以期为临床治疗心血管疾病肾损害提供研究基础。
1 材料与方法
1.1 实验动物
健康7周龄雄性Wistar大鼠50只，体重(210±20) g，SPF级，由青岛市药检所动物中心提供。将大鼠随机分为正常对照组(10只)、模型组(20只)和治疗组(20只)。
1.2 鲤鱼汤的制备
鲤鱼汤：野生黄河鲤，购于青岛产芝水库。除去鱼腮肠杂，剔除夹脊白筋，留鳞。水鱼重量比4∶1。武火煎煮至沸，后文火煎煮90 min，期间搅拌助鱼肉分离。滤除鱼汤，二次煎煮前擂碎鱼渣，余同前。2次鱼汤混匀，低温超滤浓缩至250%(即1 mL含鲤鱼2.5 g)和500%(1 mL含鲤鱼5 g)。聚乙烯食品级塑料袋分装密封，置于-20℃冰箱备用，使用前1 h水浴箱37℃加热。
1.3 大鼠心肌缺血再灌注模型的制备
造模方法参考文献[3]并加以改进，模型组和治疗组大鼠麻醉后暴露心脏，结扎冠状动脉前降支，将一根直径2 mm塑料管置于结扎线与冠状动脉之间，塑料管压迫引起冠状动脉闭塞，造成急性心肌缺血。缺血35 min后抽去塑料管，再灌注100 min。
1.4 给药方法
1.5 检测指标
1.5.1 酶联免疫吸附法检测IL-2、IFN-γ 取大鼠血清及标准液各50 L加入酶标板，37℃孵育30 min；每孔加酶标抗体50 L，37℃孵育30 min。洗涤5次加底物显色；终止反应后，酶标仪测OD值。
1.5.2 血清生化指标 实验第15天，以10%水合氯醛3 mL/kg腹腔麻醉，心脏穿刺采血，37℃恒温水浴箱中静置30 min后，3 000 r/min，离心10 min取上清液。日立7170全自动生化分析仪检测血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)等。
1.5.3 组织学观察 应用苏木精-伊红染色方法，观察心肌组织及肾脏的形态学改变情况。
1.6 统计学处理
2 结果
2.1 心肌和肾脏组织形态学变化
3 讨论
心肌缺血再灌注损伤是指缺血的心肌细胞在恢复血供后引起的更为严重的损害。有学者证实[4]，心肌损害后可以大大增加肾脏受损的概率，在心肌有明显损害患者的血清中，其肌酐水平大多数明显升高并且随着病情的进展而加重。Richard PE Van D等[5]的研究表明，急性心肌梗死的大鼠其肾功能明显受损，认为主要是由于在肾脏内发生了炎性反应所导致的结果。现代研究表明，鲤鱼汤具有抑制炎性反应、抗氧化、参与免疫调节等功能[6]。本实验即基于以上研究结果而设计的。
IL-2、IFN-γ是机体免疫网络中重要的细胞因子，在免疫调节中起到了关键的作用。IL-2属于抗炎因子，在机体内可刺激NK细胞增殖和分化，从而杀灭微生物[8-9]；IFN-γ是细胞免疫的效应因子，能促进TH1细胞的增殖，同时也是CD8 T细胞发挥作用的重要方式[10-12]。本实验结果表明，与对照组相比，模型组血清中IL-2、IFN-γ明显升高 ......
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