CDC6基因G1321A多态性与肝细胞肝癌遗传易感性关联研究(1)
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[摘要] 目的 探讨细胞分裂周期蛋白6基因(CDC6)的G1321A(rs13706)位点多态性在中国广西人群中与肝细胞肝癌(hepatecellular carcinoma，HCC)易感性的关系。 方法 采用病例-对照研究方法，对580例HCC患者和667例对照者，运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性实验分析CDC6基因rs13706位点多态性，并应用Logistic回归模型分析该位点多态性与肝细胞肝癌遗传易感性的关系。 结果 携带AA基因型的个体较携带GG基因型的个体患HCC的风险显著降低[Odd ratio(OR) = 0.474，95% confidence interval(95%CI) = 0.315～0.714，P = 0.000 9]，并在分层分析中发现rs13706位点与HBV感染因素存在显著的交互作用(Phomogeneity = 0.033)。 结论 CDC6基因rs13706位点可能与中国广西人群HCC发生相关。
[关键词] CDC6；多态性；单核苷酸；肝细胞肝癌；rs13706
[中图分类号] R735.7 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2013)02(b)-0011-03
肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)在世界范围内最常见的癌症中排名第五，并且在癌症导致的死亡的疾病中排名第三，已经成为全球性的健康问题[1]。现在，每年肝癌患者的数量都会增加500 000，平均每年的发病率都在3%～4%[2]。在发展中国家，大多数肝癌患者由于缺乏有效的治疗，其预后不佳，并且5年存活率也比较低。HCC发病过程是由多种因素影响的，并且是多阶段的一种复杂的疾病。众所周知，乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)或丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)的感染是导致HCC发病的重要的风险因素，但在乙型肝炎患者或丙型肝炎患者中，只有一小部分个体最终罹患肝癌[3]。因此，人们对肝癌发生的确切机制还未知晓，我们需要对肝癌发生的风险因素做进一步的阐释。细胞分裂周期蛋白6(CDC6)最初被发现是作为DNA复制复合物前体的重要组成部分，并在DNA复制的起始阶段发挥重要的作用[4]。有研究发现CDC6与细胞周期检验点的激活有关，可以避免DNA复制的不完整性[5]，还有证据表明CDC6与细胞凋亡的进程有关[6]。在一些肿瘤诸如宫颈癌、肺癌和脑癌中都发现有CDC6蛋白的过表达[7-9]。CDC6作为一种多功能分子开关在肿瘤的发生过程中发挥了重要的作用[10]。目前CDC6基因G1321A(rs13706)多态位点在中国人群中与肝癌易感性的关系鲜有报道，因此，本研究采用病例-对照研究来阐释这个问题。
1 资料与方法
1.1 一般资料
本次病例-对照研究包括580例HCC患者和667例对照者。病例来自于2005年5月～2011年7月在广西壮族自治区肿瘤医院收治的确诊新发HCC患者，HCC的确诊主要通过病理学检查或临床免疫学检验甲胎蛋白(AFP)>400 μg/L且经过磁共振成像和计算机扫描成像判断。667例对照个体为在同一时间段内，来该医院进行健康体检的个体，并且没有肝癌及其他癌症的患病情况。所有研究对象无直系亲属关系。在病例及对照招募过程中，通过问卷调查的方式收集每位入选者的个人信息包括人口学资料等情况。所有研究对象均填写了知情同意书。
1.2 基因型分析
采用多聚酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法分析rs13706位点的基因型，上下游引物分别是5′-CTTCTGAGCCTCTGATTCCC-3′和5′-TCCATCCCAACTTACCTTCC-3′。每个PCR反应体系混合物为20 μL(Gene Amp PCR System 9700，Applied Biosystem，USA)，包括：2 mM MgCl2，0.1 mM dNTPs，20 ng DNA，0.25 μM上游引物和0.25 μM下游引物，0.5 U Taq酶(Promega，Madison，WI，USA)。反应条件：94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸45 s，共35个循环。PCR反应产物经TasI (MBI Fermentas，Hanover，MD，USA)酶切，酶切产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳分型，A等位产生148 bp和61 bp 2个片段，G等位产生209 bp的片段。随机抽取10%的样本进行测序验证 ......
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