凋亡抑制基因在急性白血病及骨髓增生异常综合征中的研究(2)
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参见附件。
1.3.2 cDNA的合成引物设计均由上海生工生物工程公司合成。MCL-1：正义链为5′-CAAAAACGAAGACGATGTGAAA-3′，反义链为5′-AAAGGCACCAAAAGAAATGAGA-3′，扩增产物长度为109 bp；livin：正义链为5′-GAGCCAGTGTTCCCTCCAT-3′，反义链为5′-CTCCTCCTCTTCCTCCTCTGTC-3′，扩增产物长度为224 bp；aven：正义链为5′-ATGGAACCTGAGCAACCAAGTA-3′，反义链为5′-CGTTAGAAGGCAACCAAGATTT-3′，扩增产物长度为128 bp；GAPDH：正义链为5′-AGAAGGCTGGGGCTCATTTG-3′，反义链为5′-AGGGGCCATCCACAGTCTTC-3′，扩增产物长度为224 bp。总反应体系为10 μl，包括总RNA 2 μl、5×Prime ScriptR Buffer 2 μl、RNase Free dH2O 6 μl，混匀后，用离心机甩至底部；反应条件为37℃、15 min(反转录反应)，85℃、5 s(反转录酶的失活反应)，降至4℃，反应终止。
1.3.3 PCR按照PCR反应试剂盒(Takara公司)说明书操作步骤进行。PCR反应体系为20 μl，包括逆转录产物2 μl，上、下游引物各0.8 μl，SYBRR Premix Ex TaqTmⅡ(2×)10 μl，ROX Reference Dye(50×)0.4 μl，dH2O 6 μl。扩增条件为：95℃预变性30 s，95℃变性5 s，60℃退火31 s，40个循环。
1.3.4 2-ΔΔCt法采用2-ΔΔCt法分析基因相对表达量，ΔΔCt=ΔCt样本-ΔCt对照，ΔCt=Ct(样本/对照)-Ct内参。
1.4 统计学处理
采用SPSS 17.0统计软件对数据进行分析和处理，计量资料以x±s表示，采用单因素方差分析，计数资料采用χ2检验，相关性采用Pearson相关分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 3组MCL-1、livin、aven表达水平及表达率的比较
AL组和MDS组MCL-1、livin、aven mRNA的表达水平及阳性表达率分别高于对照组 ......
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