脑缺血/再灌注通过神经性一氧化氮合酶诱导KA受体亚基GluR6巯基亚硝基化的研究(2)
1.2.3蛋白含量的测定 从1.2.2中提取的胞浆蛋白组分，以牛血清白蛋白为标准蛋白，按照改良Lowry法[16]，测定蛋白含量。
1.2.4蛋白S-亚硝基化的测定 采用生物素转化法(Biotin-Switch method)[17]，整个实验过程中避光并使用毛面试管。实验方法如下：液氮中取出CA1组织后，以含250 mmol/L HEPES-NaOH，pH=7.7，1 mmol/L EDTA，0.1 mmol/L neocuproine的HEN液匀浆，4℃ 1000×g离心10 min，留取上清；上清组分测蛋白浓度，统一调整蛋白浓度至0.4 g/L，按0.4 mg蛋白分装，以HEN液补充总体积到1 ml；分装的蛋白中加入10% CHAPS调整终浓度为0.4%，加入4倍体积blocking buffer，置于50℃水浴20 min，并不断摇匀；取出后加入2倍体积冰丙酮并放入-20℃冰箱20～30 min，取出后4℃ 2000×g离心10 min ......
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1.2.4蛋白S-亚硝基化的测定 采用生物素转化法(Biotin-Switch method)[17]，整个实验过程中避光并使用毛面试管。实验方法如下：液氮中取出CA1组织后，以含250 mmol/L HEPES-NaOH，pH=7.7，1 mmol/L EDTA，0.1 mmol/L neocuproine的HEN液匀浆，4℃ 1000×g离心10 min，留取上清；上清组分测蛋白浓度，统一调整蛋白浓度至0.4 g/L，按0.4 mg蛋白分装，以HEN液补充总体积到1 ml；分装的蛋白中加入10% CHAPS调整终浓度为0.4%，加入4倍体积blocking buffer，置于50℃水浴20 min，并不断摇匀；取出后加入2倍体积冰丙酮并放入-20℃冰箱20～30 min，取出后4℃ 2000×g离心10 min ......
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