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编号:13272680
miR—155在肾癌组织中的表达及其临床意义(2)
http://www.100md.com 2018年10月5日 《中国当代医药》 2018年第28期
     樣本切成薄片,在液氮中碾碎至粉状,按Trizol试剂说明书提取总RNA,DEPC处理过的蒸馏水溶解。琼脂糖凝胶电泳法检测RNA的完整性。

    1.4 miR-155表达分析

    miR-155的正向特异性引物:5′-CTCAACTGGTGTCGTGGGGCA ATTCAGTTG AGCCCCTACT -3′。1 μg总RNA以茎环引物进行逆转录,反应条件为:25℃ 10 min,42℃ 60 min,52℃ 15 min,70℃ 15 min,反应结束后-20℃保存。PCR扩增上游引物为:5′- TGCCTCCAACTGACTCCTAC-3′,下游引物为:5′-GCGAGCACAGAATAATACGAC-3′,PCR扩增条件为:95℃变性5 min后,95℃ 30 s,60℃ 30 s,68℃ 30 s,22个循环,PCR产物大小63 bp。U6内参PCR以oligo dT逆转录的cDNA为模板,U6上游引物为5′-CTCGC TTCGGCAGCACA-3′,下游引物为5′-AACGC TTCAC GAATTTGCGT-3′ ......
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