耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的IMP—4耐药基因LAMP检测(2)
1.2 判定及排除标准(1)耐碳青酶烯类肺炎克雷伯菌判定标准:根据美国临床实验室标准化协会(CLSI)2016年版标准(CLSIM100-S26)[4],厄他培南≤18 mm、亚胺培南和美罗培南的抑菌圈直径≤19 mm判断为耐药或VITEK-2药敏显示这三种抗生素中介/耐药,需进行手工法确认。美罗培南、亚胺培南或厄他培南三者中,至少对其中之一耐药的菌株为耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌。(2)排除标准:剔除重复标本。
1.3 主要仪器与试剂
DNA核酸提取试剂盒(博奥生物公司);LAMP引物合成(上海生工生物工程有限公司);BstDNA聚合酶(北京百奥莱博科技有限公司);VlTEK2-compact全自动细菌分析仪(法国生物梅里埃公司)。
1.4 方法
1.4.1 细菌DNA的提取(玻璃珠法) 采用博奥生物公司细菌核酸提取试剂盒提取。
1.4.2 引物设计 引物设计根据Genebank公布的基因序列,用PrimerExplorer4.0引物设计软件进行目标序列引物设计,获取一套特异性IMP-4基因的LAMP引物 ......
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